CRISPR-dCas9定點調控技術路線

概要：

1.設計sgRNA

2.構建sgRNA表達載體

3.構建dCas9-SAM基因激活表達載體，dCas9-KRAB基因沉默表達載體

4.建立dCas9-SAM穩轉株、dCas9-KRAB穩轉株

5 .轉染sgRNA

6 .ChIP檢測dCas9系統的靶向效率

7 .qPCR或WB檢測下游基因表達

• 1 . CRISPR-Cas9系統
  • 1.1. CRISPR-Cas9組成
  • 1.2. 作用機制
  • 1.3. 不同的Cas9系統
  • 1.4. Cas9-基因敲除
  • 1.5. Cas9-敲入系統
• 2 . CRSPER- dCas9系統
  • 2.1. dCas9-轉錄調控系統
  • 2.2. dCas9-基因激活與抑制系統
  • 2.3. dcas9-表觀遺傳系統
• 3 . dCas9技術路線
  • 3.1. gRNA設計
  • 3.2. dCas9實驗流程
  • 3.3. 實驗問題與解決方案