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實驗技術流程

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實驗常見問題

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結果分析

      在分析轉錄調控作用位點時，一般先采取Luciferase片段缺失實驗初步分析，確定目標調控因子是否調控目標基因的轉錄及大概的作用區域。對縮小范圍的區域進行生物信息學預測可能位點后，采用Luciferase定點突變實驗確定真正的轉錄調控位點。標準結果及結論如下所示：

      1 Luciferase片段缺失實驗

      經檢測發現多次裁切對熒光素酶表達量產生的影響相同（即檢測組與空白組有明顯差異，但各裁切的檢測組間沒有明顯差異），故可推斷轉錄調控位點應位于-282~近啟動子端區域。

      2 Luciferase定點突變實驗

      對不同位點（生物信息學預測）分別進行點突變，LXRE2位點突變后的檢測組與野生型的檢測組間存在明顯差異，而LXRE1位點突變后的檢測組與野生型的檢測組間沒有明顯差異，故可推斷轉錄調控位點應為LXRE2。

• 1 . 基因表達調控概述
  • 1.1. 轉錄調控與轉錄激活
  • 1.2. 轉錄后調控
  • 1.3. miRNA與lncRNA
• 2 . 基因表達調控研究進展
• 3 . 基因表達調控研究方法
• 4 . 基因表達調控主要實驗技術
  • 4.1. 染色質免疫沉淀技術 ChIP
  • 4.2. RNA結合蛋白免疫沉淀技術 RIP
  • 4.3. RNA pull-down
  • 4.4. DNA pull-down
  • 4.5. 熒光素酶檢測技術 Luciferase
  • 4.6. 凝膠遷移/電泳遷移率實驗 EMSA